《宠物人兽共患传染病防控》 | 第二章 宠物人兽共患动物疫病的监测 第一节 采样的一般原则与采样方法

动物病料的采集是动物疾病诊断、流行病学的调查、免疫学监测工作的重要环节。大多数传染病的诊断是需要通过实验室检验的，用特异的诊断方法或者分离出病原才能确诊。因此，要采集病料送到实验室进行检验。

一、采样的一般原则

采样人员应该熟知动物防疫的有关法律规定，具有一定的专业知识，能熟练地掌握以下采样的原则，以保证采集的样品完整、采样人员自身的安全和环境的安全。采样原则有以下方面。

（1）当发现有急性死亡的动物时，如果怀疑是炭疽病，则不可随意解剖，应采集患病动物的血液进行血液抹片镜检，排除炭疽病后方可进行病理剖检。

（2）如果采样的目标为已经死亡的患病动物，那么应该及时采集病料，一般应该在动物死亡后2小时以内采集，最迟不能超过6小时。

（3）采样过程中所需的一切器具均需要做消毒处理，确保样品的准确性，同时一套采样器具只能采集一种样品，不得交叉使用。

（4）根据不同的疾病种类或者采样的目的，合理选择病料。抽样时应满足统计学的要求，减少和消除影响样品代表性的因素。

（5）采集血液样品前，一般应禁食8小时。

（6）采样时尽量减少对动物的刺激和损害，避免对采样者构成威胁。

（7）采样时要从胸腔到腹腔，要先采实质的脏器，尽量做到无菌，要避免外源污染，然后采腔肠器官等容易造成污染的组织和内容物等。

（8）采取的病料要有代表性，应为病变明显部位。采取病料时要根据不同疫病或者检验目的采取相应位置的病料，当肉眼难以判断病因时，要全面系统的采集病料。检查病变和采集病料需要统筹考虑。

（9）采样人要加强个人防护，必须严格遵守生物安全操作的相关规定，做好环境消毒和病害尸体的处理，以避免对环境、样品的污染和对采样人员的伤害。

二、采样方法

采样前，要考虑采样的目的，根据检验项目和要求的不同，选择适当的样本和适宜的采样方法，合理采集样本。经常用到的采样方法如下。

1.血液样品的采集

采集动物血液是采样的一项重要内容，对疫病检测有重大意义。采血的过程中要严格地保持无菌操作。采血前要用酒精棉球对需要采血的部位进行消毒。采血完毕后，要局部消毒并用干棉球按压止血。采血所用的注射器和试管最好要用一次性的。

2.动物活体样品的采集

动物活体样品采集主要是腔拭子、咽拭子和泄殖腔拭子，取无菌棉拭子插入被采样动物的鼻腔、喉头内或者泄殖腔中转动3圈左右后取出，插入离心管中（离心管事先装好1mL磷酸缓冲液（PBS）），剪去多余的部分，盖紧瓶盖然后做好标记保存。羽毛的采取方法是将含有羽髓的羽根部分按编号分别剪下收集到采样管内，并在每管中滴加2～3滴蒸馏水（当羽髓丰满时也可以选择不滴加），用玻璃棒将羽髓全部挤压到管中。

3.粪便样品的采集

粪便样品的采集根据不同的实验目的分为3种，包括用于病毒检验、用于细菌检验和用于寄生虫检验。其中用于病毒检验的粪便必须要新鲜。采集少量样品时，可以用灭菌的棉拭子从直肠深处或者是泄殖腔黏膜上蘸取粪便，放入灭菌的含有磷酸缓冲液的采集管中密封。当需要采集较多量的粪便时，可将动物肛门周围消毒，用器械或者戴上胶皮手套伸入直肠内直接取粪便。将收集到的粪便装入灭菌的容器内，做好标记冷藏保存。用于细菌检验的粪便样品，最好是在动物使用抗菌药物之前，从直肠或者泄殖腔中采取新鲜的粪便样品。采样方法与病毒检验的方法相同。所收集的样品装入灭菌容器中做好标记冷藏保存。用于寄生虫检验的粪便样品应选自新鲜的粪便或者直接从直肠内采取，这样可以保持虫体或者虫体节片以及虫卵的固有形态。一般寄生虫检验所需要的粪便量较多，采取时应该从粪便的内外各层采取。用于寄生虫检测的粪便应以冷藏不冻结的状态保存。

4.生殖道样品的采集

生殖道样品主要包括动物流产排出的胎儿、死胎、胎盘、阴道分泌物、阴道冲洗液、阴茎包皮冲洗液、精液和受精卵等。对于流产的胎儿以及胎盘要无菌采取病变组织，或者将整个胎儿用塑料薄膜或者不透水的油纸包起来冷藏运回实验室。精液用人工方法收集，注意不要加入防腐剂。采取阴道、阴茎包皮分泌物时可以用棉拭子从深处采样，放入含有缓冲液的采集管中，冷藏保存。

5.皮肤样品的采集

病变的皮肤处如果有新鲜的水疱皮、痂皮或者结节等可以直接剪取3～5克。如果是寄生虫病则在患病皮肤与健康皮肤交界处，用小刀与皮肤垂直刮取皮屑直到皮肤有轻微出血，收集皮屑用于检验。

6.脓汁样品的采集

采集已经破口脓灶处的脓汁时，宜用棉拭子蘸取；未破口的脓灶处采取脓汁时，用注射器抽取脓汁。

7.尿液样品的采集

当动物排尿时用干净的容器直接接取。也可以使用塑料袋，固定在雌性动物外阴部或者雄性动物的阴茎下接取尿液。采取尿液样品时宜在早晨进行。也可以用导管导尿或者膀胱穿刺采集。

8.关节及胸腹腔积液的采集

关节腔渗出液和皮下水肿液的采集可以用注射器直接从积液处抽取。胸腔渗出液则在右侧第五六肋骨间或者左侧第六七肋骨间用注射器刺入抽取。腹腔积液采集则是在最后肋骨的后缘右侧腹壁作垂线，然后由膝盖骨向前引一水平线两线交点为穿刺部位用注射器抽取。

9.乳汁的采集

先将乳房用消毒水消毒，并且把乳房附近的毛刷湿，把最初挤出的3～4滴乳汁弃去，然后采集10mL左右的乳汁置于灭菌的试管中。如果是用于血清学检验的乳汁不能冻结、加热或者强烈晃动。

10.病变组织脏器的采集

用于做病理组织学检验时，必须保持新鲜，样品应该包括病灶以及邻近正常组织的交接部位。用于病原组织样品的采集时，用于微生物学检验的病料必须要保证新鲜，并且要尽可能的减少污染。分为两种情况，第一是用于细菌分离的样品，需要首先用烧红的刀片烧烙被采样组织的表面，在烧烙部位的表面刺一个孔然后用铂金耳伸入孔内取少量组织然后用于检验。所有采集的组织应该分别放入灭菌容器中，贴上标签，然后冷藏，必要时可以做冻结处理，但是冻结的时间不宜过长。用于病毒检验的组织样品采集时要注意必须用无菌技术采集，然后放入无菌容器中，做好标签，冷藏保存，如果运送时间较长可做冻结处理或者是放入缓冲液中然后再冷藏保存。

11.肠管及肠内容物样的品采集

对于肠管的采集应该用线扎紧病变明显部位（大约5～10cm）的两端，然后从扎线外侧剪断，将该段病变的肠管放入容器中，冷藏保存送检。对于肠内容物的采集应该是选择病变明显的部位，取内容物，用灭菌的生理盐水轻轻地冲洗，或者是烧烙肠壁表面，再用吸管扎入肠腔内吸取内容物，将采集到的肠内容物放入灭菌的30%甘油盐水缓冲液中冷藏保存送检。

三、采样时机

采集样品时一定要把握好采样的时机，以保证采集到的样品为典型样品，有助于后期实验室检验。

（1）通常情况下，对于要采集的常规病料，有临床症状需要做病原分离的时候，样品必须要在病发的发热时期或者症状表现的典型时期进行采样，病死的动物应该立即进行采样。

（2）采集血液样品时，如果是用于病毒检验的样品，要在动物发病初体温升高期间采集；对于没有症状的带毒的动物，一般是在进入隔离场后7天以前进行采样。用于免疫动物血清学检测时，需要采集双份的血清监测比较抗体效价变化情况的，其中第一份血清要采于发病的初期并且要做冻结保存；第二份血清要采于第一份血清采取后的第3～4周，两份血清同时冷藏保存送于实验室检测。

（3）用于寄生虫检验的样品，由于不同的血液寄生虫在血液中出现的部位以及出现的时机各不相同，因此，需要根据各种血液寄生虫的特点来选取相应的时机以及部位的血来制成血涂片和抗凝血，低温保存，送于实验室检测。

（4）在进行免疫效果监测时，在动物免疫后的14～20天内，要随机采集样品，低温保存并送检。

四、采样数量

在采集样品的过程中，对采样的数量有一定的要求，样品的数量一定要具有全面性、概括性。具体要求如下。

（1）如果进行疫情的监测和流行病学调查时，要采集血清、各种拭子、体液、粪尿或者皮毛样品等，采样的数量可以根据动物的年龄、季节和周边疫情情况估算出感染率，然后计算出应采取样品的数量。

（2）如果是进行免疫效果监测时，要在动物免疫后的14～20天内，随机采取该群动物的血清样品30份。

（3）对病死动物采样时，有病变的器官组织、血清和抗凝血各取10份。

（4）当进行种群疫病监测净化时，需要制订疫病监测净化方案，然后按照确定的采样次数和采样日期，逐头进行采样。

采样是从整体样品中采取能有代表性的样品，然后通过感官检查和实验室检查，来了解样品的病原学指标，以做出正确的评估。采样人员对采样的原则、方法、时机和数量的准确把握至关重要。只有采集的样品完整，具有概括性，后期实验室检验才具有意义。